Diagnosis herpes

Diagnosis herpes didasarkan pada perilaku para pelepasan virus klasik dalam kultur sel sensitif, immunofluorescence dan metode serologi, melakukan studi kolposkopi menggunakan metode molekuler-biologi modern (PCR, dot-hibridisasi), yang memungkinkan Anda untuk mendiagnosa semua kelompok virus herpes, termasuk HHV-6 dan HHV-7 jenis.

Metode diagnosis laboratorium infeksi herpes

Metode utamanya ditujukan untuk mensekresikan HSV atau mendeteksi partikel virus dan / atau komponennya	Metode tambahan bertujuan untuk mendeteksi antibodi terhadap HSV dalam cairan biologis tubuh manusia
Isolasi HSV dalam budaya sensitif sel dan hewan Mikroskopi Elektron Langsung dan Imun Pilihan MFA langsung dan tidak langsung IFA Metode biologi molekuler Reaksi aglutinasi lateks	Reaksi netralisasi RSK Penentuan antibodi terhadap protein non-struktural HSV-1,2

Hal ini menunjukkan bahwa 76% pasien herpes genital (GH) disebabkan oleh HSV-2, dan pada tipe 24% - HSV-1. Dan GG sebagai monoinfeksi hanya terjadi pada 22% pasien, pada 78% kasus, asosiasi mikroba terdeteksi. Pada 46% pasien, parasitocenosis yang disebabkan oleh dua patogen terdeteksi, termasuk klamidia yang terdeteksi pada 40% kasus. Kurang sering di smear ditentukan gardnerelly, Trichomonas, gonococci.

Pada 27% pasien, parasitokenosis diwakili oleh tiga, dan 5,2% oleh empat patogen. Dan lebih sering ada kombinasi klamidia dengan jamur Gardnerella dan Candida. Data ini membenarkan perlunya pemeriksaan bakteriologis menyeluruh terhadap pasien dengan GH dengan tujuan untuk mengidentifikasi kombinasi agen patogenik, dan juga studi mendalam tentang patogenesis infeksi campuran pada saluran urogenital, yang akan memungkinkan terapi kompleks infeksi herpetik.

Bahan yang harus dipelajari dalam isolasi HSV tergantung lokalisasi lesi herpetik

Pelokalan lesi	Isi dari vesikula	Sel gesekan				SDC	Aspirat dari bronkus	Bioptat	Darah
		1	2	3	4
Kulit	+								+
Mata			+						+
Genitalia				+					+
Anus	+				+				+
Mulut	+	+							+
SSP	+					+		+	+
Ringan		+					+		+
Hati								+	+
Herpes bawaan	+	+	+				+		+

Metode diagnosis laboratorium infeksi sitomegalovirus

Metode	Waktu yang dibutuhkan untuk mendapatkan hasil	Catatan
VIRUSOLOGI
Mikroskop elektron	3 jam	Membungkuk
Isolasi virus dalam kultur sel (CPD)	4-20 hari	Standar, Lambat
Pewarnaan immunofluoresen AH awal dengan antibodi monoklonal	6 jam	Kurang spesifik
CYTOLOGICAL	2-3 jam	Kurang spesifik
SEOLOGIS
RSK	2 hari	Standart
Ssubsistence	1 hari	Sulit
REEF	6 jam	Sederhana, spesifik
NFIF	6 jam	Rumit
RIMF	6 jam	Rumit
IFA (IgM, TO)	6 jam	Cepat, sederhana
Immunoblot	6 jam	Mahal
MOLEKULAR-BIOLOGI
MG	5-7 hari	Mahal, menyita waktu
PCR	3 jam	Mahal

Metode untuk mendiagnosis virus herpes zoster

Metode Diagnostik	Teknik laboratorium
TIDAK LANGSUNG
Alokasi	Kultur kain, embrio ayam, hewan percobaan, budidaya bersama dengan sel permisif atau virus penolong
Identifikasi isolat	Reaksi netralisasi, DSC, IF, IPPE, reaksi isolat endapan, aglutinasi, IF
LANGSUNG
Sitologi	Smear: imunofluoresensi warna
Histologi	Patomorfologi sel
Struktur	Mikroskopi embrio, mikroskop immunoelektronik
Penentuan antigen	JIKA, PIÉF, RIM, IFA
Penentuan produksi antibodi lokal	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Pendekatan Biologis Molekuler	Hibridisasi molekuler, PCR

Diagnosis laboratorium infeksi disebabkan oleh virus herpes zoster

Masalah diagnostik	Metode	Hasil yang Diharapkan
Infeksi primer akut	1	Deteksi setelah 2 jam
	2	Tingkat antibodi tumbuh perlahan
	3	Hadir 3 hari setelah infeksi
Akut mengaktifkan kembali infeksi	1	Deteksi ULV dalam 2 jam
	2	Tingkat antibodi tumbuh perlahan
	4	Hadir 4 hari setelah munculnya ruam

1. penentuan dalam cairan vesikula WIEF;
2. serologi: DSC, ELISA, bertujuan untuk mengidentifikasi
3. Serologi: ELISA, bertujuan untuk mendeteksi IgM;
4. serologi: ELISA, bertujuan untuk mendeteksi IgA, IgM.

Metode untuk menunjukkan respon imun infeksi karena virus herpes zoster

Pendekatan	Metode
Deteksi peningkatan titer antibodi pada serum kedua	RSK, RTGA, RPGA, Reaksi netralisasi JIKA, RIM, ELISA
Deteksi Ig G, Ig Antibodi spesifik kelas pada sampel serum pertama	IFA, IF, RIM, lateks-aglutinasi

Interpretasi hasil pemeriksaan serologis sera pasien terhadap infeksi herpesvirus (ELISA)

Nama infeksi / penanda	Ambang rata-rata untuk infeksi
	Hasil analisis	Interpretasi
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Positif 1-6 Positif 6-10 Positif> 10 Negatif Positif 100-300 Negatif <90 Diragukan 90-100	Remisi Kelebihan penyakit Fase akut penyakit Tidak ada infeksi (penyakit) Fase akut penyakit Ulangi analisis setelah 2-3 minggu.
Herpes sederhana 1,2 serotipe Anti-HSV 1/2 total. (100-900%)	Positif 100-400 Positif 400-800 Positif> 800 Negatif <100	Remisi Kejengkelan penyakit Fase akut penyakit Tidak ada infeksi (penyakit)

Tabel ini menyajikan metode utama diagnostik laboratorium infeksi herpesvirus, dan juga merekomendasikan bahan biologis yang diperiksa untuk isolasi HSV, dengan mempertimbangkan lokalisasi lesi herpetik.

Reliable adalah alokasi herpes simpleks dan CMV melalui infeksi kultur sel yang sensitif. Jadi, dalam pemeriksaan virologi terhadap 26 pasien dalam periode kambuh, HSV diisolasi pada kultur sel Vero yang sensitif dalam 23 kasus (88,4%). Pada kultur yang terinfeksi, pola karakteristik tindakan sitopatik HSV diamati - pembentukan sel raksasa multinukleat atau akumulasi sel membulat dan membesar dalam bentuk tandan. Pada 52,1% kasus, adalah mungkin untuk mendeteksi fokus efek sitopatik virus tersebut selama 16-24 jam setelah infeksi. Dengan 48-72 jam inkubasi kultur yang terinfeksi, persentase bahan yang menyebabkan kerusakan sel tertentu meningkat menjadi 87%. Dan hanya pada 13% kasus, hasil positif terdeteksi 96 jam setelah infeksi dan banyak lagi atau dengan passaging berulang.

Metode diagnosis laboratorium infeksi herpes generalisata

Metode utama yang ditujukan untuk mendeteksi (isolasi) virus herpes, partikel dan komponennya	Metode tambahan bertujuan untuk mendeteksi antibodi terhadap virus herpes dalam cairan biologis, mendeteksi perubahan enzimatik dalam serum darah.
Isolasi virus Herpes pada kultur sel rentan dan hewan elektron langsung dan kekebalan tubuh mikroskop metode immunoperoxidase langsung dan tidak langsung perwujudan langsung dan tidak langsung teknik antibodi fluoresen pilihan opsi ELISA Perwujudan molekul (DNA-DNA) hibridisasi Polymerase Chain Reaction Reaksi aglutinasi lateks	Netralisasi pelengkap reaksi fiksasi reaksi aglutinasi lateks langsung fluorescent metode antibodi perwujudan langsung metode immunoperoxidase varian Perwujudan ELISA Cara kekebalan blotting fiksasi radial Metode pelengkap Penentuan tingkat alanin dan aspartat

Untuk mendiagnosa mononukleosis menular (infeksi yang disebabkan oleh VEB), metode serologis digunakan. Reaksi Paul Bunnel dengan eritrosit ram, titer diagnostik 1:28 dan lebih tinggi dengan satu studi serum, atau peningkatan antibodi 4 kali lipat dalam pemeriksaan serum berpasangan. Gunakan reaksi Goff-Bauer dengan suspensi 4% sel darah merah formal yang diobati. Hasilnya diperhitungkan setelah 2 menit, dengan infeksi mononukleosis yang sangat spesifik.

Saat ini, enzim immunoassay (ELISA) sedang dikembangkan untuk mendiagnosis mononukleosis menular. Dalam kasus ini, antibodi IgG dan IgM dalam serum pasien ditentukan dengan menginkubasi dengan limfoblas yang terinfeksi EBV, diikuti dengan pengobatan dengan antibodi neon. Pada periode akut penyakit, antibodi terhadap antigen kapsid virus ditentukan pada titer 1: 160 dan di atas.

Bila menggunakan sejumlah sistem tes komersial impor di IFA dapat mengidentifikasi: antibodi untuk antibodi amplop Egan EBV semut untuk antigen awal EBV, antibodi keseluruhan terhadap antigen awal EBV, ditentukan pada fase akut dari penyakit dan dalam inti dan sitoplasma, dan antibodi yang terbatas EBV awal, ditentukan pada fase akut dari penyakit dan dalam inti dan sitoplasma sel, dibatasi antibodi terhadap antigen awal EBV, ditentukan di tengah-tengah penyakit hanya dalam sitoplasma sel, dan antibodi terhadap antigen nuklir EBV. Penggunaan sistem uji ini memungkinkan diagnosis diferensial sejumlah penyakit yang terkait dengan EBV.

Setelah ELISA positif untuk mengidentifikasi antibodi EBV memberikan imunoblot respon mengkonfirmasikan, yang mendeteksi adanya antibodi untuk memisahkan protein EBV penanda (p-protein): P23, P54, p72 (kehadiran protein menunjukkan kemungkinan reproduksi EBV), p 138. Kata Metode laboratorium di atas digunakan untuk mengendalikan keefektifan pengobatan.

Sensitivitas metode virologi adalah 85-100%, spesifisitasnya 100%, waktu studi 2-5 hari. Seringkali dalam prakteknya, metode imunofluoresensi langsung (PIF) dengan antibodi poliklonal atau monoklonal terhadap HSV-1 dan HSV-2 digunakan. Metode UIF dapat dengan mudah direproduksi di laboratorium klinis konvensional, tidak mahal, kepekaannya di atas 80%, spesifisitasnya 90-95%. Mikroskopi imunofluoresensi menunjukkan adanya inklusi sitoplasma, ciri morfologi, persentase sel yang terinfeksi di bekas luka-kerokan dari saluran kencing, serviks, serviks, rektum.

Metode UIF memberi gambaran tentang sifat morfologi sel dan perubahan lokalisasi antigen HSV. Selain tanda langsung kerusakan sel oleh virus herpes (deteksi luminesensi spesifik), ada tanda-tanda infeksi herpes yang tidak langsung sesuai dengan data UIF:

• agregasi materi nuklir, pengelupasan kulit karyoolma;
• kehadiran yang disebut inti "lubang", bila hanya satu karyolemma yang tertinggal dari nukleus sel;
• adanya inklusi intranuklear - anak sapi Caudry.

Saat menyiapkan UIF, dokter tidak hanya menerima penilaian kualitatif tetapi juga kuantitatif mengenai keadaan sel yang terinfeksi, yang kami gunakan untuk mengevaluasi keefektifan terapi antiviral dengan asiklovir (AC). Dengan demikian, 80 pasien herpes genital sederhana (GG) diperiksa dengan metode UIF dalam dinamika. Hal itu menunjukkan bahwa, sebelum diobati dengan asiklovir dalam apusan, 88% pasien memiliki persentase sel yang tinggi (50-75% dan lebih tinggi), kemudian setelah satu asiklovir dalam apus 44% pasien menunjukkan sel sehat, 31% 25% pasien memiliki hingga 10% sel yang terinfeksi.

Kandungan sel yang terinfeksi dalam smear (reaksi PIF) pada pasien herpes genital, diobati dengan asiklovir

Periode penyakit	Persentase di aplikasikan
	Sel yang terinfeksi					sel normal
	Lebih dari 75%	50-75%	40-50%	10%	Sel tunggal di n / sp
Kambuh (sebelum perawatan)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisi (setelah perawatan)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Menggunakan UIF bertahun-tahun dan metode hibridisasi titik, hampir 100% kasus bertepatan dengan hasil penelitian. Perlu dicatat bahwa untuk meningkatkan keandalan diagnosis GH, terutama dalam kasus-kasus di mana ada subklinis dan bentuk malomanifestnyh herpes, disarankan untuk menggunakan 2-3 metode diagnosis laboratorium, terutama ketika memeriksa wanita hamil, wanita dengan riwayat kehamilan kurang beruntung, orang-orang dengan diagnosis ginekologi yang tidak ditentukan.

Jadi, ketika PCR mendiagnosis infeksi bakteri-virus pada saluran urogenital, penting untuk mengevaluasi hasil positif yang diperoleh dengan mempertimbangkan anamnesis, adanya (atau tidaknya) gejala klinis spesifik dari penyakit ini. Jika klamidia terdeteksi dengan PCR, maka dalam kasus ini adalah mungkin untuk membicarakan infeksi dan mengatasi masalah terapi yang sesuai. Dalam kasus deteksi mikoplasma (ureaplasma), yang merupakan mikroorganisme oportunistik, diperlukan studi budaya tambahan untuk mengkonfirmasi diagnosis, yaitu menabur bahan dari pasien ke kultur sel yang sensitif. Hanya bila hasil positif diperoleh dalam analisis budaya dapatkah kita berbicara tentang konfirmasi laboratorium tentang diagnosis mikoplasmosis. Metode yang sama akan memungkinkan, jika perlu, untuk menentukan sensitivitas mikoplasma terisolasi terhadap bentuk obat yang sering digunakan (antibiotik, fluoroquinolones, dll.).

Mungkin satu tahap infeksi dengan beberapa virus keluarga Nepresviridae. Seringkali kita mendeteksi infeksi satu pasien dengan virus HSV-1, HSV-2 dan CMV. Yang lebih sering terinfeksi dengan beberapa virus herpes adalah pasien dengan manifestasi klinis dan laboratorium dari IDS sekunder (pasien dengan onkologi, onkologis, terinfeksi HIV). Dengan demikian, terlihat bahwa kelainan klinis dan imunologi yang berkembang pada infeksi HIV disertai dengan peningkatan jumlah herpesvirus yang terdeteksi dengan metode hibridisasi molekuler. Dalam prognostik ini yang paling penting dapat dianggap sebagai deteksi satu tahap DNA DNA tipe HSV-1, CMV dan HHV-6 yang kompleks.

[1], [2], [3]