Semua konten iLive ditinjau secara medis atau diperiksa fakta untuk memastikan akurasi faktual sebanyak mungkin.
Kami memiliki panduan sumber yang ketat dan hanya menautkan ke situs media terkemuka, lembaga penelitian akademik, dan, jika mungkin, studi yang ditinjau secara medis oleh rekan sejawat. Perhatikan bahwa angka dalam tanda kurung ([1], [2], dll.) Adalah tautan yang dapat diklik untuk studi ini.
Jika Anda merasa salah satu konten kami tidak akurat, ketinggalan zaman, atau dipertanyakan, pilih dan tekan Ctrl + Enter.
PCR sebagai metode untuk mendiagnosis penyakit genetik
Ahli medis artikel
Terakhir ditinjau: 04.07.2025
PCR merupakan pencapaian baru genetika molekuler, yang digunakan untuk amplifikasi DNA dan memungkinkan penggandaan cepat secara in vitro dari suatu daerah DNA tertentu (yaitu gen apa pun yang diinginkan) lebih dari 200.000 kali. Untuk melakukan reaksi, cukup memiliki materi DNA dari satu sel; jumlah DNA yang diamplifikasi oleh PCR sangat besar sehingga DNA ini dapat dengan mudah diwarnai (penggunaan probe radioaktif setelah elektroforesis tidak diperlukan). Prasyarat untuk melakukan PCR adalah pengetahuan tentang urutan nukleotida dari daerah DNA yang diamplifikasi untuk pemilihan primer yang disintesis secara artifisial dengan benar.
Saat ini, PCR merupakan proses tabung tunggal yang terdiri dari siklus amplifikasi (reproduksi, penyalinan) berulang dari urutan molekul DNA tertentu untuk memperoleh salinan dalam jumlah yang cukup besar yang dapat diidentifikasi melalui elektroforesis. Salah satu komponen utama reaksi adalah "primer" - oligonukleotida sintetis yang terdiri dari 20-30 basa yang saling melengkapi dengan "situs" (area) penempelan (attachment) pada area DNA matriks yang diidentifikasi.
PCR berlangsung secara otomatis dalam termostat yang dapat diprogram - siklus termal (penguat). Siklus tiga tahap, yang menghasilkan salinan persis dari bagian DNA matriks yang diidentifikasi, diulang 30-50 kali sesuai dengan program siklus termal yang ditentukan. Pada siklus pertama, oligoprimer berhibridisasi dengan DNA matriks asli, dan kemudian (dalam siklus berikutnya) dengan molekul DNA yang baru disintesis saat terakumulasi dalam campuran reaksi. Dalam kasus terakhir, sintesis DNA berakhir bukan sebagai akibat dari perubahan suhu, tetapi setelah mencapai batas DNA polimerase dari bagian yang diperkuat, yang menentukan ukuran bagian DNA yang baru disintesis dengan akurasi satu nukleotida.
Elektroforesis digunakan sebagai metode untuk mendeteksi molekul DNA yang diperoleh, dengan bantuan bahan yang diperkuat dipisahkan menurut ukuran amplikon (produk amplifikasi).
PCR dapat digunakan untuk memeriksa langsung lokasi dugaan mutasi atau situs polimorfik, serta untuk mempelajari keberadaan fitur DNA spesifik lainnya.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]