Studi imunologi dalam urologi

Pemberian imunogram kepada pasien urologi berarti dokter yang merawat mencurigai adanya gangguan pada sistem imun. Infeksi bakteri, virus, jamur yang berulang, manifestasi alergi, penyakit sistemik dapat menjadi tanda-tanda gangguan ini, yang ditandai dengan sejumlah sindrom (infeksi, onkologi, alergi, autoimun, limfoproliferatif). Satu pasien mungkin memiliki beberapa sindrom. Misalnya, penyakit infeksi kronis (sindrom infeksi) dapat menyebabkan defisiensi imun, dan defisiensi imun dapat memanifestasikan dirinya sebagai predisposisi terhadap penyakit infeksi dan onkologi (sindrom onkologi). Predisposisi terhadap infeksi dapat terjadi dengan latar belakang defisiensi imun sekunder, yang berkembang sebagai akibat dari penyakit limfoproliferatif, seperti leukemia. Ada tiga kelompok utama perubahan patologis dalam sistem imun:

• kekurangan kuantitatif atau fungsional dari satu atau beberapa bagian sistem imun, yang mengarah pada perkembangan kondisi imunodefisiensi;
• gangguan dalam pengenalan antigen oleh sistem imun, yang menyebabkan berkembangnya proses autoimun;
• respon imun yang hiperreaktif atau "menyimpang", yang dimanifestasikan oleh perkembangan penyakit alergi.

Terdapat metode penyaringan (tes level 1) dan metode klarifikasi (tes level 2) dalam imunodiagnostik. Metode pertama digunakan untuk mencatat gangguan pada sistem imun, sedangkan metode kedua digunakan untuk menetapkan mekanisme yang terlibat dalam penerapannya untuk tujuan imunokoreksi lebih lanjut.

Kekebalan sel B

Metode penyaringan

• Penentuan jumlah relatif dan absolut limfosit B menggunakan imunofluoresensi atau flow cytofluorometry dengan antibodi monoklonal terhadap antigen sel B (CD19, CD20, di mana CD adalah cluster diferensiasi). Kandungan normal limfosit B pada orang dewasa adalah 8-19% dari jumlah total leukosit atau 190-380 sel/μl. Peningkatan kandungan limfosit B terjadi pada infeksi bakteri dan jamur akut dan kronis, penyakit hati kronis, penyakit jaringan ikat sistemik, leukemia limfositik kronis, dan mieloma.
• Penentuan konsentrasi imunoglobulin non-spesifik (F, M, G, E) dengan imunodifusi radial sederhana, nefelometri atau turbometri, radioimunoassay atau enzim immunoassay (ELISA). Norma untuk orang dewasa: imunoglobulin (Ig) A 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. Peningkatan konsentrasi imunoglobulin terjadi pada kondisi patologis yang sama di mana peningkatan kandungan limfosit B terjadi. Penurunan konsentrasi imunoglobulin terjadi pada hipogamaglobulinemia kongenital, neoplasma sistem imun, pengangkatan limpa, kehilangan protein, penyakit ginjal atau usus, pengobatan dengan sitostatika dan imunosupresan.

Metode klarifikasi

• Penentuan kompleks imun yang bersirkulasi dalam darah dengan presipitasi selektif dalam polietilen glikol diikuti dengan pengujian kepadatan spektrofotometri (normal 80-20 U). Peningkatan kompleks imun yang bersirkulasi merupakan ciri khas infeksi bakteri, jamur, virus akut, autoimun, penyakit kompleks imun, serum sickness, reaksi alergi tipe 3;
• Penentuan imunoglobulin spesifik dalam darah dalam kaitannya dengan antigen bakteri dan virus, asam deoksiribonukleat (DNA) pada penyakit autoimun, deteksi antisperma (infertilitas autoimun) dan antibodi antirenal (pielonefritis dan glomerulonefritis) dengan metode imunodifusi radial atau ELISA.
• Penentuan antibodi antisperma dalam sperma [tes MAR (reaksi antiglobulin campuran)], hasil normal - negatif.
• Penentuan konsentrasi imunoglobulin dalam urin untuk tujuan diagnosis diferensial antara pielonefritis dan glomerulonefritis (selektivitas proteinuria).
• Penentuan kandungan IgE dalam cairan prostat untuk tujuan mendiagnosis prostatitis alergi menggunakan metode imunodifusi radial atau ELISA.
• Kajian respon pada reaksi transformasi blast limfosit B terhadap mitogen sel B (mitogen pokeweed untuk stimulasi reaksi transformasi blast limfosit B pada keberadaan limfosit T) yang nilai normatifnya sebesar 95-100%.

Hubungan sel T dengan kekebalan tubuh

Metode penyaringan

• Penentuan jumlah relatif dan absolut limfosit T CD3 dewasa dengan reaksi imunofluoresensi atau flow cytofluorometry menggunakan antibodi anti-CD3 monoklonal. Norma untuk orang dewasa adalah 58-76% atau 1100-1700 sel/μl. Penurunan jumlah limfosit T merupakan indikator ketidakcukupan hubungan seluler imunitas. Ini khas untuk beberapa imunodefisiensi sekunder dan primer (infeksi bakteri dan virus kronis: tuberkulosis, sindrom imunodefisiensi didapat, tumor ganas, gagal ginjal kronis, cedera, stres, penuaan, malnutrisi, pengobatan dengan sitostatika, paparan radiasi pengion). Peningkatan jumlah limfosit T terjadi dengan latar belakang hiperaktivitas imun atau pada penyakit limfoproliferatif. Dengan peradangan, jumlah limfosit T pertama meningkat dan kemudian menurun. Tidak adanya penurunan limfosit T menunjukkan proses inflamasi kronis.
• Evaluasi subpopulasi limfosit.
  • Penentuan jumlah sel T-helper (antibodi anti-CD4). Normalnya 36-55% atau 400-1100 sel/mcl. Peningkatan jumlah sel ini terjadi pada penyakit autoimun, penyakit Waldenstrom, aktivasi imunitas antitransplantasi; penurunan jumlah sel T-helper terjadi pada infeksi bakteri, virus, protozoa kronis, tuberkulosis, sindrom imunodefisiensi yang didapat, tumor ganas, luka bakar, cedera, malnutrisi, penuaan, pengobatan dengan sitostatika, paparan radiasi pengion.
  • Penentuan jumlah T-suppressor (antibodi anti-CD4). Biasanya 17-37% atau 300-700 sel/μl. Peningkatan jumlah T-suppressor terjadi pada kondisi yang sama di mana jumlah T-helper menurun, dan penurunannya terjadi pada kondisi yang sama di mana kandungan T-helper meningkat.
  • Indeks imunoregulasi CD4/CD8, normalnya 1,5-2,5. Hiperaktivitas dengan nilai lebih dari 2,5 (penyakit alergi dan autoimun); hipoaktivitas - kurang dari 1,0 (kecenderungan infeksi kronis). Pada awal proses inflamasi, indeks imunoregulasi meningkat, dan ketika mereda, kembali normal.

Metode klarifikasi

• Penentuan jumlah sel pembunuh alami (sel NK) - antibodi anti-CD16 dan anti-CD56. Normalnya untuk limfosit CD 16 adalah 6-26%, CD56 - 9-19%. Peningkatan jumlah sel NK terjadi selama penolakan transplantasi, penurunan - dengan infeksi virus, kanker, defisiensi imun primer dan sekunder, luka bakar, cedera dan stres, pengobatan dengan sitostatika dan paparan radiasi pengion.
• Penentuan jumlah limfosit T dengan reseptor interleukin-2 (penanda aktivasi) - antibodi anti-CD25. Normalnya adalah 10-15%. Peningkatan jumlah mereka diamati pada penyakit alergi, penolakan transplantasi, respons terhadap antigen yang bergantung pada timus pada periode akut infeksi primer, penurunan - pada penyakit yang sama di mana terjadi penurunan jumlah sel NK.
• Studi ekspresi penanda aktivasi - molekul histocompatibility kelas II HLA-DR. Peningkatan ekspresi terjadi pada proses inflamasi, pada pasien dengan hepatitis C, penyakit celiac, sifilis, penyakit pernapasan akut.
• Evaluasi apoptosis limfosit. Gambaran kasar kesiapan limfosit untuk apoptosis dapat ditentukan oleh ekspresi reseptor Fas (CD95) pada permukaannya dan proto-onkogen bd-2 dalam mitokondria. Apoptosis limfosit dinilai dengan memperlakukannya dengan dua pewarna fluoresen: propidium iodida, yang mengikat fragmen DNA, dan annexin Y, yang mengikat fosfatidilserina, yang muncul pada membran sel pada awal apoptosis. Hasilnya dievaluasi menggunakan flow cytofluorometer. Hasilnya dihitung berdasarkan rasio sel yang diwarnai dengan pewarna yang berbeda. Sel yang tidak diwarnai dapat hidup, sel yang hanya terikat pada annexin Y merupakan manifestasi awal apoptosis, dengan propidium iodida dan annexin Y merupakan manifestasi akhir apoptosis, pewarnaan dengan hanya propidium iodida menunjukkan nekrosis.
• Evaluasi proliferasi limfosit T secara in vitro.
  • Perubahan dalam blastogenesis sel - reaksi transformasi blast limfosit. Leukosit diinkubasi dengan mitogen apa pun yang berasal dari tumbuhan (lektin). Fitohemaglutinin paling sering digunakan selama 72 jam, kemudian apusan diambil, diwarnai dan jumlah blast dihitung! Indeks stimulasi adalah rasio persentase sel yang ditransformasi dalam percobaan (kultur dengan fitohemaglutinin) terhadap persentase sel yang ditransformasi dalam kontrol (kultur tanpa fitohemaglutinin). Reaksi transformasi blast limfosit dapat dinilai dengan memasukkan label radioaktif (ZN-thymndinum) dalam sel yang dikultur, karena sintesis DNA meningkat selama pembelahan sel. Gangguan dalam respons proliferatif terjadi pada imunodefisiensi primer dan sekunder yang terkait dengan infeksi, kanker, gagal ginjal, dan intervensi bedah.
  • Dalam penelitian ini, ekspresi penanda aktivasi (CD25, reseptor transferin - CD71) dan molekul kompleks histokompatibilitas utama kelas II HLA-DR, yang secara praktis tidak ada pada limfosit T yang sedang beristirahat, dinilai. Limfosit T distimulasi dengan fitohemaglutinin, setelah 3 hari ekspresi penanda aktivasi dianalisis dengan metode reaksi imunofluoresensi langsung atau tidak langsung, flow cytofluorometry, menggunakan antibodi monoklonal terhadap reseptor yang diisolasi.
  • Pengukuran jumlah mediator yang disintesis oleh limfosit T yang diaktifkan [interleukin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, γ-interferon, dll.] menggunakan radioimunoassay atau ELISA. Yang paling penting adalah penilaian konsentrasi γ-interferon dan IL-4 sebagai penanda Th1 dan Th2 dalam supernatan kultur yang diaktifkan dan di dalam sel. Jika memungkinkan, penting untuk menentukan ekspresi gen untuk sitokin yang sesuai dengan tingkat asam ribonukleat matriks dalam sel penghasil dan intensitas ekspresi reseptor untuk sitokin yang sesuai.
    
• Reaksi penghambatan migrasi limfosit. Limfosit T yang tersensitisasi bereaksi terhadap antigen dan mengeluarkan limfokin, termasuk faktor penghambat migrasi limfosit. Fenomena penghambatan diamati ketika mitogen dimasukkan ke dalam kultur sel. Evaluasi tingkat penghambatan memungkinkan kita menilai kemampuan limfosit untuk mengeluarkan sitokin. Biasanya, frekuensi migrasi, tergantung pada mitogen spesifik, adalah 20-80%.
• Penilaian sitotoksisitas sel NK. Kemampuan sel pembunuh alami untuk membunuh sel target dari garis eritromieloid K-562 ditentukan. Jika sitotoksisitas yang bergantung pada antibodi dinilai, sel target yang dilapisi dengan antibodi IgG digunakan. Sel target diberi label dengan 3H-uridin dan diinkubasi dengan sel efektor. Kematian sel target dinilai dengan pelepasan label radioaktif ke dalam larutan. Penurunan sitotoksisitas terjadi pada neoplasma ganas. Dalam beberapa kasus, ketika perlu untuk memprediksi efektivitas pengobatan dengan interleukin, sitotoksisitas sel NK dinilai selama inkubasi dengan sitokin tertentu.

Studi fungsi fagosit

Metode penyaringan

Studi tentang intensitas penyerapan sel mikroba oleh fagosit (fagositosis partikel lateks, kultur uji stafilokokus, E. coli atau mikroorganisme yang diisolasi dari pasien). Dengan sentrifugasi darah yang diheparinisasi, suspensi leukosit diisolasi, serum golongan darah IV ditambahkan untuk opsonisasi (opsonin adalah protein yang meningkatkan fagositosis). Suspensi mikroba diencerkan, dicampur dengan leukosit dan diinkubasi selama 120 menit, mengambil sampel untuk analisis 30,90,120 menit setelah dimulainya inkubasi. Apusan dibuat dari suspensi leukosit yang dikumpulkan. Indikator fagositosis berikut ditentukan:

• indeks fagositosis - persentase sel yang memasuki fagositosis dalam 30 menit dan 120 menit inkubasi; nilai standar indeks fagositosis (30) adalah 94%, indeks fagositosis (120) adalah 92%;
• jumlah fagosit - jumlah rata-rata bakteri yang terletak di dalam sel; nilai standar jumlah fagosit (30) adalah 11%, jumlah fagosit (120) adalah 9,8%;
• koefisien jumlah fagosit - rasio jumlah fagosit (30) terhadap jumlah fagosit (120); normalnya 1,16;
• Indeks bakterisida neutrofil - rasio jumlah mikroba yang dimatikan di dalam fagosit terhadap jumlah total mikroba yang diserap; biasanya 66%.

Metode klarifikasi

• Studi kemampuan bakterisida fagosit dalam uji dengan nitroblue tetrazolium (NBT) - Uji NBT. Pewarna nitroblue tetrazolium kuning ditambahkan ke leukosit. Ketika neutrofil menyerap pewarna, proses reduksi terjadi di bawah pengaruh radikal oksigen bebas, yang menghasilkan warna biru. Reaksi dilakukan dalam pelat dasar datar 96 sumur. Larutan Hanks (NBT spontan) ditambahkan ke tiga sumur pertama dengan campuran NBT dan leukosit, dan partikel lateks ditambahkan ke yang kedua; campuran diinkubasi pada 37 C selama 25 menit. Hasilnya dibaca pada 540 nm pada pembaca dan dinyatakan dalam satuan sembarang. Koefisien stimulasi (K _st ) dihitung, sama dengan rasio kerapatan optik di sumur terstimulasi dengan kerapatan optik rata-rata di sumur tanpa stimulasi. Pada orang sehat NBT _spont = 90 ± 45 CU, NBT _stim = 140 ± 60 CU. K _st = 1,78±0,36.
• Studi molekul adhesi. Flow cytofluorometry digunakan untuk menentukan ekspresi antigen permukaan CD11a/CD18, CD11b/CD18, CD11c/CD18. Defisiensi imun dengan adhesi yang terganggu ditunjukkan oleh infeksi berulang, penyembuhan luka yang lambat, dan tidak adanya nanah pada fokus infeksi.

Studi sistem komplemen

Metode penyaringan

Penentuan aktivitas hemolitik komplemen merupakan studi tentang jalur klasik aktivasi komplemen. Pengenceran serum yang berbeda dari orang sakit dan sehat ditambahkan ke eritrosit domba jantan yang dilapisi antibodi. Unit aktivitas hemolitik adalah kebalikan dari pengenceran serum di mana 50% eritrosit dihancurkan. Derajat hemolisis diperkirakan secara fotometrik dengan pelepasan hemoglobin ke dalam larutan. Penurunan aktivitas hemolitik komplemen diamati pada lupus eritematosus sistemik dengan kerusakan ginjal, glomerulonefritis akut, defisiensi imun gabungan, miastenia, hepatitis virus, limfoma, peningkatan - pada penyakit kuning obstruktif, tiroiditis Hashimoto, rematik, artritis reumatoid, periarteritis nodular. dermatomiositis, infark miokard, kolitis ulseratif, sindrom Reiter, asam urat.

Metode klarifikasi

• Penentuan komponen pelengkap. Penentuan kuantitatif dilakukan dengan imunodifusi radial dan nefelometri.
  Studi ini tidak informatif kecuali sifat antigenik komponen pelengkap diubah.
• Telah ditetapkan bahwa komponen Clq dari komplemen meningkatkan fagositosis dan memediasi sitotoksisitas seluler. Penurunannya terjadi pada penyakit kompleks imun, lupus eritematosus sistemik, infeksi purulen, dan tumor.
• Komponen C3 terlibat dalam aktivasi jalur komplemen klasik dan alternatif. Penurunan konsentrasinya dikaitkan dengan infeksi bakteri dan jamur kronis, adanya kompleks imun yang bersirkulasi atau jaringan.
• Komponen C4 terlibat dalam aktivasi jalur klasik. Penurunan konsentrasinya dikaitkan dengan aktivasi komplemen yang berkepanjangan oleh kompleks imun dan penurunan konsentrasi inhibitor C1, yang mengendalikan aktivasi jalur komplemen klasik. Defisiensi C4 terjadi pada lupus eritematosus sistemik, peningkatan C4 terjadi pada penyakit ginjal, penolakan transplantasi, peradangan akut, dan penyakit gastrointestinal.
• C5a merupakan fragmen kecil dari molekul C5, yang terpisah darinya akibat aktivasi sistem komplemen. Konsentrasinya meningkat selama peradangan, sepsis, penyakit atopik dan alergi.
• Inhibitor Cl merupakan faktor multifungsi. Ia mengendalikan aktivasi komponen komplemen C1, menghambat aktivitas kallikrein, plasmin, dan faktor Hageman yang teraktivasi, protease Cls dan Or. Kekurangan inhibitor C1 menyebabkan angioedema.
• studi fungsional komplemen. Serum uji ditambahkan ke serum standar yang tidak memiliki komponen komplemen dan aktivitas hemolitik komplemen ditentukan. Jika aktivitas hemolitik tidak dikembalikan ke normal, aktivitas komponen komplemen ini dalam serum uji dianggap berkurang.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ]