Vitamin A dalam darah

Nilai referensi (norma) untuk konsentrasi vitamin A (retinol) dalam serum darah: pada anak-anak berusia 1-6 tahun - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 tahun - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 tahun - 0,91-2,51 μmol/l; pada orang dewasa - 1,05-2,09 μmol/l.

Vitamin A adalah vitamin yang larut dalam lemak dan terdapat dalam dua bentuk: vitamin A itu sendiri, atau retinol (hanya ditemukan dalam produk hewani), dan provitamin A, yang dikenal sebagai karoten (diperoleh dari produk hewani dan nabati), yang dapat diubah menjadi retinol di dinding saluran pencernaan. Sekitar 50-90% retinol makanan diserap di usus halus dan diangkut dalam kompleks yang terikat kilomikron ke hati, tempat ia disimpan sebagai retinol palmitat. Bila diperlukan, ia dilepaskan ke aliran darah sebagai retinol yang dikomplekskan dengan protein pengikat vitamin A. Dalam serum darah, kompleks protein pengikat vitamin A + retinol mengikat transthyretin. Dari serum darah, retinol diambil oleh sel target, seperti fotoreseptor retina dan epitel.

Bila tubuh menerima vitamin A dalam jumlah yang melebihi kebutuhan (180-430 mcg retinol per hari, tergantung pada usia, jenis kelamin, dan kondisi fisiologis), kelebihannya akan disimpan di hati, membentuk depot vitamin ini. Bila asupan retinol dari makanan berkurang, cadangannya dari hati dilepaskan ke aliran darah, sehingga konsentrasi retinol dalam serum darah tetap normal (di atas 0,7 μmol/l). Bentuk vitamin A lain yang aktif secara biologis (retinal dan asam retinoat) hadir dalam darah dalam konsentrasi yang sangat rendah (di bawah 0,35 μmol/l); ester retinol menyumbang sekitar 5% dari total vitamin A (0,1-0,17 μmol/l).

Vitamin A berperan penting dalam proses oksidasi-reduksi. Retinol mendorong pembentukan glikogen di hati dan otot, membantu meningkatkan kadar kolesterol dalam darah, dan berpartisipasi dalam sintesis hormon steroid dan seks. Vitamin A diperlukan untuk pertumbuhan dan pembentukan sistem rangka, resintesis rhodopsin, dan juga mendorong fungsi normal selaput lendir dan epitel integumen kulit, mencegah metaplasia, hiperkeratosis, dan pengelupasan berlebihan. Vitamin A membantu memperkuat rambut, gigi, dan gusi. Dalam beberapa tahun terakhir, peran vitamin A yang beragam dalam mencegah kanker dan mengatur kekebalan telah ditunjukkan (diperlukan untuk penyelesaian fagositosis, meningkatkan sintesis Ig, merangsang pembentukan T-killer, merangsang T-helper tipe II, dll.). Vitamin A adalah antioksidan aktif, yang terutama bekerja dengan adanya vitamin E; vitamin A melindungi vitamin C dari oksidasi. Kekurangan vitamin A dianggap sebagai faktor risiko neoplasma ganas. Studi eksperimental telah menunjukkan bahwa peningkatan kandungan vitamin A dalam makanan dapat meningkatkan harapan hidup rata-rata hingga 17,5%. Seng merupakan kofaktor penting dalam metabolisme vitamin A (diperlukan untuk sintesis protein pengikat vitamin A).

Kebutuhan retinol harian rata-rata untuk orang dewasa (20-50 tahun) adalah 1,2 mg (4000 IU, 1 IU setara dengan 0,3 mcg retinol), untuk wanita hamil - 1,5 mg (5000 IU), untuk wanita menyusui - 1,8 mg (6000 IU), untuk orang di atas 60 tahun - 2,5 mg (10.000 IU). Setidaknya sepertiga dari kebutuhan retinol harian harus dipasok ke tubuh dalam bentuk jadi; sisanya dapat dipenuhi dengan mengonsumsi karotenoid, yang darinya retinol terbentuk di dalam tubuh. Perlu diperhitungkan bahwa sekitar 30% retinol dalam produk makanan hancur selama perlakuan panas. Aktivitas retinol 2 kali lebih tinggi daripada karoten, selain itu, hanya 30-40% dari yang terakhir diserap di usus. Oleh karena itu, ketika menilai diet, diyakini bahwa 1 mg retinol kira-kira setara dengan 6 mg karotenoid.

Penentuan retinol (vitamin A) dan karotenoid dalam serum darah menurut Bessey sebagaimana dimodifikasi oleh LA Anisimova

Prinsip metode

Penentuan vitamin A dan karotenoid didasarkan pada hidrolisisnya dalam larutan alkohol alkali diikuti dengan ekstraksi dengan campuran pelarut organik.

Reagen

• Larutan kalium hidroksida (KOH) 11 M.
• 96% etil alkohol.
• Larutan kalium hidroksida (KOH) 1 M dalam etil alkohol 96%: 1 volume larutan KOH 11 M dicampur dengan 10 volume etil alkohol 96%. Reagen disiapkan pada hari penelitian. Jika terjadi pewarnaan selama pencampuran, alkohol harus dimurnikan dengan distilasi sebelum digunakan.
• Xilena, murni secara kimia
• Oktana, murni secara kimia
• Campuran xilena-oktana: disiapkan dengan mencampur xilena dan oktana dengan volume yang sama.

Penelitian dilakukan menggunakan spektrofotometer.

Proses penentuan vitamin A

Darah yang diambil dari jari (sekitar 1 ml) dimasukkan ke dalam tabung sentrifus dan ditaruh dalam gelas berisi air hangat (suhu 40-45° C) selama 20-30 menit. Untuk memisahkan serum, gumpalan darah ditarik dengan hati-hati di sekeliling tepi dinding tabung dengan batang kaca tipis dan disentrifus pada kecepatan 3000 rpm selama 10 menit.

Sebanyak 0,12 ml serum dikumpulkan dan dipindahkan ke tabung aglutinasi, kemudian ditambahkan 0,12 ml larutan alkohol kalium hidroksida 1 M. Isi tabung dikocok hingga merata.

Tabung reaksi berisi sampel ditempatkan dalam penangas air selama 20 menit pada suhu 60° C untuk melakukan hidrolisis.

Sampel didinginkan dan 0,12 ml campuran xilena-oktana ditambahkan ke dalamnya, lalu dikocok kuat-kuat selama 10-15 detik. Sampel didinginkan lagi dan disentrifugasi.

Lapisan atas yang mengandung vitamin A dan karotenoid dihilangkan secara hati-hati menggunakan pipet Pasteur dengan bola karet dan dipindahkan ke dalam mikrokuvet.

Sampel dispektrofotometer pada panjang gelombang 328 nm untuk menentukan vitamin A, dan pada panjang gelombang 460 nm untuk menentukan karotenoid.

Setelah dilakukan spektrofotometri, sampel akan disinari dengan sinar ultraviolet untuk menghancurkan vitamin A. Untuk tujuan ini, lampu kuarsa (bakterisida) dipasang pada jarak 15-20 cm dari mikrokuvet sehingga bagian kuvet yang terisi cairan akan disinari; waktu penyinaran adalah 45-60 menit.

Sampel-sampel tersebut dispektrofotometer ulang pada panjang gelombang 328 nm. Kandungan vitamin A ditentukan oleh perbedaan nilai kepunahan (kepadatan optik) dengan mempertimbangkan koefisien (faktor) 637 yang dihitung oleh Bessey untuk vitamin A.

Perhitungan dilakukan menurut rumus:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Dimana X adalah kandungan vitamin A, μg/dl; 637 adalah koefisien yang dihitung oleh Bessey untuk menentukan vitamin A; E328(1) adalah kerapatan optik larutan sebelum iradiasi; E328(2) adalah kerapatan optik larutan setelah iradiasi.

Koefisien untuk mengubah konsentrasi vitamin A dari µg/dL menjadi µmol/L adalah 0,035.

Kandungan karotenoid dihitung menggunakan rumus:

X-480-E480,

Di mana X adalah kandungan karotenoid, μg/dl; 480 adalah koefisien yang dihitung oleh Bessey untuk menentukan karotenoid; E480 adalah kerapatan optik larutan uji.

Catatan

Menurut Bessey, volume serum yang lebih besar atau lebih kecil dapat digunakan saat melakukan penelitian, tetapi rasionya terhadap volume larutan alkohol harus konstan dengan setiap perubahan volume (kuantitas) campuran xilena-oktana.

Kandungan normal vitamin A dalam serum darah adalah: pada bayi baru lahir dan bayi - 160-270 μg/l; pada orang dewasa - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Kandungan karotenoid dalam serum darah orang dewasa adalah 800-2300 μg/l.