Mikroskopi kornea seumur hidup konfokal

Mikroskopi konfokal kornea merupakan salah satu metode penelitian modern; metode ini memungkinkan pemantauan intravital kornea dengan visualisasi jaringan pada tingkat seluler dan mikrostruktur.

Metode ini, karena desain mikroskop asli dan daya resolusinya yang tinggi, memungkinkan visualisasi jaringan kornea hidup, pengukuran ketebalan setiap lapisannya, dan penilaian tingkat kelainan morfologi.

Tujuan mikroskopi konfokal kornea

Untuk mengkarakterisasi perubahan morfologi kornea yang terjadi pada berbagai penyakit inflamasi dan distrofi, serta sebagai akibat dari intervensi bedah dan paparan CL.

Data pemeriksaan morfologi diperlukan untuk menilai tingkat keparahan proses patologis, efektivitas pengobatan dan untuk menentukan taktik manajemen pasien.

Indikasi untuk prosedur ini

• Penyakit radang kornea ( keratitis ).
• Penyakit distrofik kornea ( keratoconus, distrofi Fuchs, dll.).
• Sindrom mata kering.
• Kondisi setelah intervensi bedah pada kornea ( transplantasi kornea tembus, operasi keratorefraktif).
• Kondisi yang terkait dengan pemakaian lensa kontak.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Persiapan

Pemeriksaan ini dapat dilakukan tanpa menggunakan anestesi. Setetes cairan imersi diteteskan pada lensa objektif mikroskop confocal. Hal ini menghilangkan kontak langsung lensa dengan kornea dan meminimalkan risiko kerusakan epitel.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Teknik mikroskop konfokal kornea

Pemeriksaan ini dilakukan dengan menggunakan mikroskop confocal ConfoScan 4 (Nider) dengan perbesaran 500 kali. Alat ini memungkinkan kornea diperiksa secara menyeluruh.

Ukuran area yang diperiksa adalah 440×330 μm, ketebalan lapisan pemindaian adalah 5 μm. Lensa dengan setetes gel dibawa ke kornea hingga menyentuh dan dipasang sehingga ketebalan lapisan cairan imersi adalah 2 mm. Desain perangkat memungkinkan pemeriksaan kornea di zona sentral dan area parasentralnya.

Kontraindikasi terhadap prosedur

Kontraindikasi relatif adalah iritasi mata parah akibat proses peradangan akut.

[ 10 ], [ 11 ]

Kinerja normal

Gambaran morfologi kornea yang normal

Epitel anterior terdiri dari 5-6 lapisan sel. Ketebalan rata-rata seluruh epitel adalah sekitar 50 µm. Berdasarkan struktur morfologinya, lapisan-lapisan berikut dibedakan (dari dalam ke luar): sel basal, sel berbentuk penusuk, dan sel superfisial.

• Lapisan paling dalam (basal) diwakili oleh sel-sel kecil, padat, dan silindris tanpa inti yang terlihat. Batas-batas sel basal jelas dan terang.
• Lapisan tengah terdiri dari 2-3 lapisan sel berduri (bersayap) dengan tonjolan dalam yang di dalamnya tertanam pertumbuhan sel-sel di sekitarnya. Secara mikroskopis, batas-batas sel dapat dibedakan dengan cukup jelas, dan nukleusnya mungkin tidak jelas atau mungkin tidak jelas.
• Lapisan epitel superfisial diwakili oleh satu atau dua lapisan sel poligonal dengan batas yang jelas dan kepadatan yang homogen. Inti sel biasanya lebih terang daripada sitoplasma, di mana cincin gelap perinukleus juga dapat dibedakan.

Di antara sel-sel lapisan superfisial, sel-sel gelap dan terang dibedakan. Peningkatan reflektivitas sel-sel epitel menunjukkan penurunan laju metabolisme dan dimulainya deskuamasi.

Membran Bowman adalah struktur transparan yang tidak memantulkan cahaya, sehingga biasanya mustahil untuk memvisualisasikannya dengan mikroskopi konfokal.

Pleksus saraf subbasal terletak di bawah membran Bowman. Biasanya, serabut saraf tampak sebagai garis-garis terang yang berjalan sejajar pada latar belakang gelap, saling bersentuhan. Reflektifitas (daya pantul) mungkin tidak merata di sepanjang serabut.

Stroma kornea menempati 80 hingga 90% dari ketebalan kornea dan terdiri dari komponen seluler dan ekstraseluler. Elemen seluler utama stroma adalah keratosit; mereka membentuk sekitar 5% dari volume.

Gambaran mikroskopis stroma yang khas mencakup beberapa badan berbentuk oval tidak beraturan yang terang (inti keratosit) yang terletak dalam ketebalan matriks abu-abu gelap atau hitam yang transparan. Biasanya, visualisasi struktur ekstraseluler tidak mungkin dilakukan karena transparansinya. Stroma dapat dibagi secara kondisional menjadi beberapa sublapisan: anterior (terletak langsung di bawah membran Bowman dan membentuk 10% dari ketebalan stroma), anterior-tengah, tengah, dan posterior.

Kepadatan rata-rata keratosit lebih tinggi di stroma anterior, dan secara bertahap menurun ke arah lapisan posterior. Kepadatan sel stroma anterior hampir dua kali lebih tinggi daripada sel stroma posterior (jika kepadatan sel stroma anterior diambil 100%, maka kepadatan sel stroma posterior akan menjadi sekitar 53,7%). Di stroma anterior, inti keratosit berbentuk bulat seperti kacang, sedangkan di stroma posterior berbentuk oval dan lebih memanjang.

Inti keratosit dapat bervariasi dalam tingkat kecerahannya. Kemampuan yang berbeda untuk memantulkan cahaya bergantung pada kondisi metabolismenya. Sel yang lebih terang dianggap sebagai keratosit yang aktif (sel "stres"), yang aktivitasnya ditujukan untuk mempertahankan homeostasis internal kornea. Dalam bidang normal dan visual, ditemukan sel tunggal yang aktif.

Serabut saraf dalam stroma kornea anterior divisualisasikan sebagai pita-pita homogen yang terang, sering kali membentuk percabangan.

Membran Descemet biasanya transparan dan tidak terlihat melalui mikroskop konfokal.

Epitel posterior merupakan satu lapis sel pipih heksagonal atau poligonal dengan permukaan yang terang merata dengan latar belakang batas antar sel yang gelap dan jelas.

Perangkat ini memiliki kemampuan untuk menghitung kepadatan sel, luasnya dan koefisien variabilitasnya secara manual atau otomatis.

Perubahan patologis pada struktur kornea

Keratoconus ditandai oleh perubahan signifikan pada epitel anterior dan stroma kornea.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]